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原果膠含量測試盒(比色法)
AS6321397
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原果膠含量試劑盒說明書

                                            微量法100T/48S

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

果膠是植物細胞壁主要組成成分之一,分為水溶性果膠和不溶性果膠,即原果膠。因其具有良好的乳化、增稠和凝膠作用,在食品、紡織、印染、煙草、冶金等領域具有較廣泛的應用。

測定原理

原果膠在稀酸中水解為可溶性果膠,并進一步轉化為半乳糖醛酸,產物在強酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物,在530 nm處有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品

天平、研缽、常溫離心機、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、濃硫酸和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液一:液體100mL×2瓶,4℃保存。

提取液二:液體100mL×1瓶,4℃保存。

標準品:液體1mL×1支,4℃保存。

試劑一:濃硫酸,自備。

試劑二:液體2mL×1支,4℃保存。

試劑三:液體3mL×1瓶,4℃避光保存。

樣品處理

將組織樣品搗碎,按照樣品質量(g)和提取液一體積(mL)為1: 20的比列(建議取約0.05g樣品,加入1mL提取液一),置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min,取出冷卻后于5000g、 25℃離心10min,去掉上清,沉淀中再加入1mL提取液一重復操作一次,離心后去上清,沉淀中加入1mL提取液二,置于90℃恒溫水浴鍋中水解1h,取出冷卻后于8000g、25℃離心15min,取上清液待測。

測定操作表

 

空白管

標準管

對照管

測定管

樣本(μL)

 

 

30

30

標準品(μL)

 

30

 

 

濃硫酸(μL)

180

180

180

180

混勻、90℃水浴10min,取出后冷卻

試劑二(μL)

 

 

30

 

試劑三(μL)

30

30

 

30

混勻,25℃靜置30min

蒸餾水(μL)

90

60

60

60

充分混勻,取200μL置于微量石英比色皿/96孔板中,測定530nm處吸光值,分別記為A1、A2、A3和A4?!鰽1=A2-A1,△A2=A4-A3

注意:空白管和標準管只需測定一次。

計算公式

  1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C標準×V標) ×△A2÷△A1÷(W÷V樣總) = 0.25×△A2÷△A1÷W

C標準:標準品濃度,0.25mg/mL;V標:反應體系中加入標準品體積,0.02mL; V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本鮮重,g。

  1. 用96孔板測定的計算公式如下

原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C標準×V標) ×△A2÷△A1÷(W÷V樣總) =0.25×△A2÷△A1÷W

C標準:標準品濃度,0.25mg/mL;V標:反應體系中加入標準品體積,0.02mL; V樣總:加入提取液體積,1mL; W:樣本鮮重,g。

注意事項

  1. 濃硫酸具有強腐蝕性,操作時需特別注意,90℃加熱取出后冷卻再打開蓋子,以防液體飛濺燒傷。                                                                                                                                                                                                                                       
  2. 若吸光值超過1,可將樣本提取液進行適當稀釋再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。
  3. 最低檢出限為10μg/g。

 

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