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共價結合型果膠(CSP)含量測試盒(比色法)
AS6321396
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共價結合型果膠(CSP)含量試劑盒說明書

                                 微量法 100管/48樣

正式測定前取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

果膠是構成細胞初生壁和中膠層的主要成分,主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是許多高等植物細胞壁中含量最豐富的多糖成分,其獨特的物理、化學性質影響著植物源食品的口感和品質。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環偶聯的方式交聯,通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠,如水溶性果膠(WSP)、離子結合型果膠(ISP)和共價結合果膠(CSP)。

測定原理:

利用帶有螯合劑的堿溶液提取共價結合型果膠(CSP),采用咔唑比色法測定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中與咔唑試劑進行縮合反應,生成物質在530 nm處有最大吸收峰。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、丙酮、濃硫酸(不允許快遞)、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:液體100mL× 1瓶,4℃保存。

試劑二:液體100mL× 1瓶,4℃保存。

試劑三:標準液1mL× 1支,4℃保存。

試劑四:液體5mL× 1瓶,4℃保存;

樣品的前處理: 

  1. 細胞壁的提?。喝〖s0.3g樣本,加入1mL 80%乙醇,室溫快速勻漿,95℃水浴20min,冷卻至室溫,4000g 25℃離心10min,棄上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(渦旋振蕩2min左右,4000g 25℃離心10min,棄上清即可),沉淀即為粗細胞壁,加入1mL試劑一(去除淀粉)浸泡15小時,4000g 25℃離心10min,棄上清,將沉淀干燥,稱重得細胞壁物質(CWM)。
  2. CSP的提?。悍Q取烘干的CWM 3mg,加入1mL試劑二,充分勻漿(若烘干物質質地堅硬,可先研碎后再加入1mL試劑二勻漿,或者用勻漿器勻漿)。8000g 4℃離心10min,取上清液待測。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至530nm處,蒸餾水調零;試劑三和試劑四37℃預熱10min以上;

2、操作表:

試劑名稱(μL)

空白管

標準管

對照管

測定管

待測樣本

 

 

50

50

試劑三

 

50

 

 

蒸餾水

50

 

50

 

試劑四

50

50

 

50

  混勻  

濃硫酸

400

400

400

400

混勻,95℃水浴5min后,冷卻至室溫,取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中,530nm處讀取吸光值,空白管、標準管、對照管和測定管吸光值分別記為A1、A2、A3和A4。若A大于2,需將待測樣本用蒸餾水稀釋(可稀釋10倍或20倍)??瞻坠芎蜆藴使苤灰鲆还?,每個測定管需設一個對照管。

CSP含量計算:

CSP含量(mg /g 干重)= (C標準×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數

C標準:標準管濃度,0.05mg/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL; W:樣本干重,g。

注意:最低檢測限為50μg /g 干重 

 

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