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人轉谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)ELISA試劑盒
A096797
貨號 規格 目錄價 會員價 庫存 數量 購買
A096797 96T ¥2800.00 登錄查看
A096797-48T 48T ¥1500.00 登錄查看
A096797-96T 96T ¥2200.00 登錄查看

用途
該試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿或其他相關生物液體中濃度。
 
 
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的抗原會與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素??贵w與結合在包被抗體上的抗原結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,抗原濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中指標的濃度。
 

反應類型 夾心法
規格 96T
反應時間 4.5h
反應性 通用
檢測方法 Colormetric
靈敏度 檢測下線除以10
樣本體積 100μL
樣本類型 血清、血漿或其他相關生物液體
特異性 可檢測樣本中的指標,且與其它相關蛋白無明顯交叉反應
重復性 板內,板間變異系數均<10%
 
樣品活化方法
生物樣品中的通常以無活性的形式存在,在檢測指標活性前必須進行活化處理。
活化方法如下:
血清、血漿: 280 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品,混勻,加入40 μL活化試劑1,室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2,混勻后立即檢測。
注意:樣品被稀釋了10倍!
細胞培養上清:20 μL標準品&樣品稀釋液中加入100 μL樣品,混勻,加入40 μL活化試劑1,室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2,混勻后立即檢測。
注意:樣品被稀釋了2倍!
組織勻漿:1960 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品,混勻后檢測。
注意:樣品被稀釋了50倍!
 
精密度
板內精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
  批內變異系數 批間變異系數
樣本 1 2 3 1 2 3
數量 20 20 20 20 20 20
平均值( MERGEFIELD 單位ng/mL) 0.41 1.07 4.96 0.47 1.25 4.24
標準差 0.02 0.05 0.22 0.03 0.06 0.2
變異系數 (%) 4.88 4.67 4.43 6.38 4.8 4.72
 
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍和平均回收率。
樣本類型 回收率范圍 (%) 平均回收率 (%)
血清(n=5) 94-110 102
血漿(EDTA)(n=5) 90-102 96
細胞上清(n=5) 95-106 98
 
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白,做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實驗,得出回收率范圍及平均回收率。
    血清(n=5) 血漿(EDTA)(n=5) 細胞上清(n=5)
1:2 回收率范圍(%) 99-108 95-105 92-104
平均回收率(%) 105 102 97
1:4 回收率范圍(%) 95-109 90-100 97-105
平均回收率(%) 102 96 100
1:8 回收率范圍(%) 89-103 89-104 96-108
平均回收率(%) 97 97 102
1:16 回收率范圍(%) 88-102 98-108 92-105
平均回收率(%) 94 104 100
 
試劑盒組成及保存
未拆封的試劑盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用試劑盒,請拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置
說明書 1份 1份
封板膜 2片 2片
密封袋 1個 1個
酶標包被板 1×48 1×96
標準品 0.3ml×6管 0.3ml×6管
酶標試劑 5 ml×1瓶 10 ml×1瓶
樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶
終止液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶
20×濃縮洗滌液 15ml×1瓶 25ml×1瓶
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置
說明書 1份 1份
封板膜 2片 2片
密封袋 1個 1個

說明:所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發和微生物的污染。
試劑體積以實際發貨版說明書為準。相關試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些,請在使用時量取而非直接倒出。
 
 
操作步驟
1. 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。
4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
9. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
 
試驗所需自備物品
1. 酶標儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙
 

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